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人外周血淋巴細胞分離液使用說明
更新時間:2021-07-09   點擊次數:693次

人外周血淋巴細胞分離液使用說明

 

外周血中單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞等細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同,紅細胞和粒細胞密度較大,為1.090 g/ml 左右,而淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小板為1.030~1.035 g/ml。為此,將葡聚糖(右旋糖酐)和梵影酸葡甲胺按一定比例混合,調整比重、pH 值和滲透壓,經過澄清及過濾除菌后制成一種密度在1.077g/ml 并且近于等滲的溶液(分層液),經過密度梯度離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。

本品為帶有乳光或微乳光的注射水溶液,主要組成成份是葡聚糖(右旋糖酐)與梵影酸葡甲胺。適用于從人抗凝血液中分離單個核細胞(主要為淋巴細胞),無菌條件下所分離的細胞可用于免疫學檢測。

分離方法說明及圖例:

取新鮮抗凝血1ml,與生理鹽水1:1 混勻后,小心加于2ml細胞分離液之液面上;以400g(約1500轉/分,半徑15cm水平轉子)離心20分鐘,此時離心管中由上至下細胞分四層。第一層:為血漿層。第二層:為環狀乳白色淋巴細胞層。第三層:為透明分離液層。第四層:為紅細胞層。收集第二層細胞放入含生理鹽水4-5ml的試管中,充分混勻后,以400g(約1500轉/分)離心20分鐘。沉淀經2次洗滌后即得所需淋巴細胞。

注: 提取率約為80%。

注意事項:

A.本分離液要求血液為新鮮抗凝血,避免冷凍和冷藏;在收集血液和分離過程中,應注意無菌操作,避免微生物污染。

B.本實驗要求,在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度,在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復溫20分鐘以保證分離溫度。

C.由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調節離心轉數和離心時間,摸索佳的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。

D.好使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。

E.優抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積。

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