葡聚糖凝膠系列產品操作方法快收藏
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹。親水基質使其非特異性吸附小化,并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G 型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
使用方法
Sephadex 系列產品以干粉形式存在,使用前必須溶脹,在膨脹期間應避免過度攪拌,因為它可能破壞填料,不要使用磁力攪拌器。
1、填料的準備
(1)將填料在過量去離子水或緩沖液中,室溫條件下膨脹 24 小時,或用熱水膨脹 1 小時。洗脫緩沖液不應含有高粘度的試劑。溶脹過程中,如果上層有漂浮物,請去除。
(2)將溶脹好的填料,所有的緩沖液等材料平衡至實驗操作溫度,對所有的緩沖液進行脫氣處理。
2、裝柱
(1)檢查層析柱所有部件,特別是過濾網,密封圈,螺旋塞是否緊密,玻璃管是否干凈和完整。
(2)將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位,務必使底端無氣泡。
(3)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(4)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,使柱床穩定(注意壓力不要超過填 料大耐壓)。
注意事項:
(1)上樣之前,樣品必須經過膜過濾及去除色素,否則雜質及色素會被吸附到填料上,影響填料的 正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過濾器過濾。
(2)在使用過程中,避免使用高濃度的強酸強堿,酸和堿的濃度應低于 0.1 摩爾。堿會使流速變慢。
上一篇 : 人外周血淋巴細胞分離液使用說明