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ELISA免疫測定,你學會了嗎?
更新時間:2020-01-03   點擊次數:661次

ELISA免疫測定,你學會了嗎?

 

ELISA**測定目的是?

1.測定體液中的各種蛋白質,包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等;

2.測定**,包括小分子量的甾體**等;

3.測定***和**;

4.測定病原體抗原,HBsAg、HBeAg等;

5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體,例如抗-HBs等;

 

ELISA**測定原理

①使抗原(或抗體)結合到某種固相載體表面,并保持其**活性;

②使抗原(或抗體)與某種酶聯結成酶標 抗原(或抗體),而且此酶標抗原(或抗體)既保留其**活性,又保留其酶活性;

③測定時將受檢標本(抗體或抗原)和酶標抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應,再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開,結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成比例;再加入酶反應底物后,底物被酶催化后變為有色產物,根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析,以了解被測標本中抗體或抗原含量。

 

ELISA**測定步驟

1. 包被;

2. 加樣:加稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔);

3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘;

5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml;

6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調零后測各孔OD值。

 

引起ELISA測定錯誤結果的原因

標本因素、試劑因素、操作因素。

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